Les pharmaciens et les chimistes rencontrent dans leur travail de nombreux mélanges organiques naturels et mélanges de réactions chimiques. En tant que tel, un système de chromatographie liquide à haute performance (HPLC) est l'un des instruments les plus essentiels pour tout laboratoire. Un instrument HPLC vous permet de séparer et d'analyser ces mélanges (quantitativement et qualitativement). Dans ce type de chromatographie sur colonne, la taille des particules de la phase stationnaire est suffisamment faible pour que le solvant puisse passer au travers; pour surmonter cela, une pression élevée de 3000-5000 psi est appliquée. C'est la technique la plus sensible, efficace et précise.

Pas

  1. 1 Suivez les règles et règlements et portez votre tablier.
    • Nettoyez le HPLC.
    • Allumez-le et attendez qu'il commence.
    • Préparez l'instrument pour l'analyse.
    • Conservez le solvant / solvant dans la phase mobile dans le réservoir de solvant ou le plateau de solvant. Le solvant est utilisé pour séparer les composants du mélange. Dans les instruments modernes, le mélange de solvants peut être utilisé comme phase mobile appelée élution en gradient. L'élution est la séparation en composants.
    • Utilisez du méthanol-eau ou du chloroforme-heptane, etc. comme solvant.
  2. 2 Sélectionnez les types de HPLC en fonction de la polarité relative des phases:
    • Phase normale: Utilisez une phase stationnaire polaire comparative par rapport à la phase mobile si vous effectuez une HPLC en phase normale.
    • HPLC en phase inverse: Utilisez une phase mobile moins polaire par rapport à la phase stationnaire. La phase généralement inverse est utilisée.
  3. 3 Introduisez les données dans le système ou programmez le HPLC.
    • Attribuez le numéro aux solvants lorsque vous optez pour l'élution en gradient.
    • Spécifiez le débit.
    • Réglez la pression de la pompe.
  4. 4 Analysez votre échantillon.
    • Ajoutez votre échantillon dans le système d'injection. C'est le mécanisme qui introduit l'échantillon (le mélange à séparer) dans le système.
    • Chargez la phase stationnaire dans la colonne.
    • Démarrez le HPLC en cliquant sur le bouton de démarrage sur l'écran de l'ordinateur qui lui est associé.
    • Attendez un certain temps pour la séparation du mélange en composants. Le temps de rétention est le temps nécessaire au solvant pour séparer les composants, ce qui correspond au temps pendant lequel le mélange dans la colonne est détecté / analysé.
  5. 5 Développez vos composants. Attendez que votre mélange soit séparé en ses composants. Cela s'appelle le développement, lorsque le contenu de l'échantillon sera détecté par le détecteur.
  6. 6 Observez le résultat. Regardez la séparation des composants détectés et enregistrés sur le graphique. Il y aura différents pics correspondant aux composants et à leur concentration.
  7. 7 Appliquez vos résultats à votre travail. Il existe de nombreuses utilisations de la HPLC en pharmacie, en chimie et dans des industries telles que la production alimentaire. Certaines applications importantes suivent.
    • Utilisez-le pour l'analyse qualitative en comparant le temps de rétention observé dans des conditions identiques.
    • Utilisez HPLC pour l'analyse quantitative, comme l'évaluation de la concentration des composants.
    • Analyser la séparation des lipides.
    • Utilisez-le pour des réponses à des travaux judiciaires sur des cas criminels / empoisonnés.