L'électrophorèse est le terme utilisé pour étudier la manière dont les particules chargées se déplacent dans un milieu lorsqu'elles sont soumises à un champ électrique. Les particules traverseront le gel à différentes vitesses, en fonction de la charge portée par la particule et de la taille de la particule qui doit traverser le milieu quelque peu restrictif. Le milieu est volontairement rendu restrictif afin que les particules forment un motif dans le milieu pouvant être analysé lorsque le champ électrique est retiré. Cette technique est utile dans la recherche médicale pour séparer l'ARN, l'ADN et les protéines en fonction de leurs capacités à se déplacer dans le gel. Utilisez ces conseils pour apprendre à faire un gel d'électrophorèse.

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  1. 1 Trouvez la concentration de gel requise. Cela doit être spécifié par le médecin et variera en fonction du type de test requis par l’étude réalisée par le médecin. Les concentrations courantes sont de 0,7%. 0,8%, 1,0% et 1,2%.
  2. 2 Obtenir un plateau de coulée de gel d'électrophorèse. Ces plateaux sont disponibles dans les points de vente de fournitures médicales. Notez le volume du plateau car il déterminera la quantité maximale de gel d'électrophorèse pouvant être faite en une fois.
  3. 3 Rassemblez les produits chimiques requis. Obtenir une quantité de Tris-Acétate-EDTA (TAE) suffisante pour combler le volume du gel en cours de fabrication. La quantité d'agarose, le polymère qui forme le gel, dépendra de la concentration du gel à fabriquer. Le pourcentage de gel exprimé est l'agarose en grammes divisé par TAE en ml. L'ingrédient final nécessaire est le bromure d'éthidium (EtBr). EtBr rend l'ADN visible sous la lumière ultraviolette. Diviser la quantité de TAE utilisée par 1000 pour déterminer la quantité d'EtBr nécessaire.
  4. 4 Ajouter l'agarose. Ajouter la quantité déterminée d'agarose à la quantité requise de TAE. Agiter doucement ou agiter le mélange pour assurer un mélange correct.
  5. 5 Préparez le mélange. L'agarose contenu dans le TAE doit être chauffé dans un four à micro-ondes pour le dissoudre. Réchauffez la solution pendant de courtes périodes, par exemple 15 secondes, à faible puissance. Vérifiez constamment la progression de la fonte. Si le TAE est réchauffé au point où des particules se forment, le lot est détruit.
  6. 6 Ajouter le EtBr. EtBr est un biohazard puissant. Des gants de laboratoire doivent être portés pour cette partie du processus. Ajouter l'EtBr une fois que le chauffage du TAE est terminé. Agiter doucement ou agiter le récipient pour assurer un mélange correct. Laisser le liquide reposer et laisser refroidir pendant 5 minutes.
  7. 7 Remplissez les plateaux de coulée. Agiter ou remuer le mélange chimique pour assurer une température uniforme dans tout le mélange. Versez le mélange soigneusement dans le plateau de coulée.
  8. 8 Insérez les peignes. Placez les peignes de coulée dans les rails de support du plateau de coulée. Les dents de peigne créeront des puits dans le gel auquel l'échantillon à tester peut être ajouté. Les peignes sont de différentes tailles pour créer des puits de différentes tailles. Les dimensions des puits à former seront déterminées par le médecin en fonction de l'étude à effectuer.
  9. 9 Laisser refroidir les plateaux de coulée et laisser reposer le gel pendant 1 heure. Retirez les peignes de coulée. Retirez le gel du plateau de coulée. Le gel d'électrophorèse est maintenant prêt à l'emploi.